Химический состав нержавеющей стали 347. Величина венозной или капиллярной крови, специфичных для SARS-CoV-2, Т-клеточных ответов определяет иммунитет к COVID-19.

Благодарим вас за посещение Nature.com.Вы используете версию браузера с ограниченной поддержкой CSS.Для оптимальной работы мы рекомендуем вам использовать обновленный браузер (или отключить режим совместимости в Internet Explorer).Кроме того, для обеспечения постоянной поддержки мы показываем сайт без стилей и JavaScript.
Слайдеры, показывающие по три статьи на слайде.Используйте кнопки «Назад» и «Далее» для перемещения по слайдам или кнопки контроллера слайдов в конце для перемещения по каждому слайду.

Химический состав нержавеющей стали 347

Химический состав змеевика из нержавеющей стали 347

Химический состав и механические свойства змеевика из нержавеющей стали 347 следующие:
- Углерод – максимум 0,030%
- Хром – 17-19%
- Никель – 8-10,5%
- Марганец – максимум 1%

Механические свойства змеевика из нержавеющей стали 347

По данным производителя змеевиков из нержавеющей стали 347, механические свойства змеевиков из нержавеющей стали 347:
- Предел прочности (psi) – 75 000 мин.
- Предел текучести (psi) – 30 000 мин.
- Удлинение (% на 2″) – 25% мин.
- Твердость по Бринеллю (BHN) – 170 макс.

Применение и использование змеевиков из нержавеющей стали 347

• Змеевик из нержавеющей стали 347, используемый на сахарных заводах.
• Змеевиковая трубка из нержавеющей стали 347, используемая в удобрениях.
• Змеевиковая трубка из нержавеющей стали 347, используемая в промышленности.
• Змеевиковая труба из нержавеющей стали 347, используемая на электростанциях.
• Змеевик из нержавеющей стали 347, используемый в пищевой и молочной промышленности.
• Змеевиковая труба из нержавеющей стали 347 используется на нефтегазовых заводах.
• Производитель змеевиковых труб из нержавеющей стали 347, используемых в судостроительной промышленности.

Считается, что Т-клетки, специфичные для SARS-CoV-2, защищают от инфекции и прогрессирования COVID-19, но прямых доказательств этому нет.Здесь мы сравнили измерения цельной крови Т-клеток, специфичных к интерферону-γ, специфичных для SARS-CoV-2, с положительными результатами диагностических тестов на COVID-19 (ПЦР и/или боковой поток) в течение 6 месяцев после взятия крови Лиан.Среди 148 участников, сдавших образцы венозной крови, степень специфического ответа Т-клеток на SARS-CoV-2 была значительно выше у тех, кто оставался защищенным, чем у тех, кто был инфицирован (P <0,0001).% риска заражения, тогда как высокая интенсивность снижала этот риск до 5,4%.Эти результаты были распространены на еще 299 участников, которые протестировали масштабируемый анализ капиллярной крови, который мог бы облегчить доступ к данным популяционного Т-клеточного иммунитета (14,9% против 4,4%).Таким образом, измерение Т-клеток, специфичных для SARS-CoV-2, может предсказать риск заражения и должно оцениваться при мониторинге индивидуального и популяционного иммунного статуса.
Измерение и понимание иммунного ответа на инфекцию SARS-CoV-2 важно для разработки эффективных будущих стратегий по минимизации последствий будущих вспышек COVID-19 для общественного здравоохранения и экономики.Идентификация иммунных коррелятов предоставит важную информацию о восприимчивости населения к вирусной инфекции, возможно, раннее предупреждение о пике госпитализации, а также позволит людям лично управлять своим риском заражения и риском заражения других.Иммунный надзор оказался решающим для оценки эффективности вакцин против COVID-19 у здоровых пациентов и пациентов из группы высокого риска1,2,3, особенно у мутантов SARS-CoV-24, а выявление пациентов с ослабленным иммунитетом будет означать необходимость повышения иммунитета. Пройдите вакцинацию и предотвратите будущие вспышки.
Уровень иммунитета человека к инфекции SARS-CoV-2 зависит от множества факторов: вирусной нагрузки на момент заражения, вариантов вируса, возраста, предыдущей вакцинации/инфекционного статуса, сопутствующих заболеваний, принимаемых лекарств и, самое главное, инфекции, вызванной SARS-CoV. .2. Адаптивный иммунный ответ возникает во время воздействия вируса5.Оценка иммунного ответа на инфекцию SARS-CoV-2 и/или вакцинацию была сосредоточена на серологических анализах, которые измеряют наличие антител, специфичных к структурному белку (например, спайковому гликопротеину).Однако наличие или отсутствие антител само по себе не позволяет точно определить защитный иммунный ответ, поскольку реакции со временем значительно ослабляются6 и нейтрализуются варианты SARS-CoV-2 у выздоравливающих или дважды вакцинированных лиц. Слабая активность, которая может привести к значительному количество прорывных инфекций7.Действительно, защита от симптоматического COVID-19, вызванного вариантом Омикрона (B.1.1.529), снизилась примерно до 10% всего после 4–6 месяцев вакцинации мРНК, хотя защита от тяжелого заболевания сохранялась >68% в течение как минимум 7 месяцев8.Измерение ответов Т-клеток адаптивной памяти, которые обеспечивают долгосрочную защиту от вирусной инфекции, является лучшим индикатором восприимчивости к инфекции SARS-CoV-2 и, следовательно, лучшим показателем риска положительного результата теста на COVID-199, поскольку специфические Т-клетки клетки могут предотвратить инфекцию.без сероконверсии10,11.Однако измерению ответов Т-клеток уделяется меньше внимания из-за методологических трудностей и логистических проблем при получении и транспортировке образцов венозной крови, особенно при проведении крупных обсервационных исследований для оценки эффективности вакцин и мониторинга иммунитета.Тем не менее, вакцинированные люди демонстрируют надежную активность Т-клеток против вариантов SARS-CoV-2, что потенциально компенсирует потерю реактивности антител и ограничивает тяжесть COVID-1912,13.
Здесь мы стремились понять, может ли однократное измерение ответа Т-клеток SARS-CoV-2 предсказать абсолютный риск заражения SARS-CoV-2 в течение 6 месяцев после взятия проб крови, независимо от предшествующих факторов, влияющих на иммунитет.Чтобы сделать тест на Т-клетки высокопроизводительным и применимым для более крупных исследований, мы также попытались сделать тест миниатюрным, чтобы его можно было проводить с использованием образца крови из капиллярного пальца.
Мы измеряли клеточные и гуморальные иммунные реакции у здоровых доноров, используя комбинированное обнаружение Т-клеток SARS-CoV-2 и антител IgG на основе цельной венозной крови (характеристики участников см. в марте 2022 г. 14. У вакцинированных доноров SARS-CoV-2- специфические Т-клеточные ответы определяли путем измерения уровней интерферона-γ (IFN-γ) в плазме после стимуляции цельной крови пептидом SARS-CoV-2 (как и ранее, ссылки 14,15,16,17,18) и IgG-ответов, связанных с с нуклеокапсидом (N) были повышены у тех, кто сообщил о предыдущей инфекции, хотя оба ответа были выше у ранее инфицированных невакцинированных доноров и максимальны в организме (рис. 1а, б).Ответы IgG против спайковых гликопротеинов (RBD, S1, S2) были самыми высокими у ранее инфицированных вакцинированных доноров (рис. 1c–e).
специфичные для SARS-CoV-2 Т-клеточные реакции IFN-γ+ измерялись с помощью анализа цельной венозной крови и основывались на вакцинации участников и предшествующем статусе инфекции SARS-CoV-2 (подтвержденном ПЦР и/или тестом латерального потока)' Vac + /Inf +' n = 60 (зеленый), 'Vac + /Inf-' n = 82 (синий), 'Vac-/Inf +' n = 4 (желтый), 'Vac-/Inf-' n = 1 (не применяется).Реакции связывания SARS-CoV-2-специфического IgG нацелены на нуклеокапсид («N») (b; ****P <0,0001, **P = 0,0016), рецептор-связывающий домен с шипами («RBD») (c; ** P = 0,0022, *P < 0,015), субъединица спайка 1 («S1») (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ vs. Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ против Vac+/Inf-) P = 0,012), а пик субъединицы 2 («S2») (e) измерялся с помощью анализов венозной цельной крови и на основании вакцинации участников и предшествующего SARS-CoV-2 (подтвержденного ПЦР и/ или тест латерального потока) инфекционный статус.'Vac + /Inf +' n = 60 (зеленый), 'Vac + /Inf-' n = 71-82 (синий), 'Vac-/Inf +' n = 4 (желтый).Сравнения проводились с использованием критерия Крускала-Уоллиса с поправкой на множественные сравнения с использованием критерия Данна.Данные отображаются в виде диаграмм (центральная линия на медиане, верхний предел на уровне 75-го процентиля, нижний предел на уровне 25-го процентиля) с усами на минимальном и максимальном значениях.Каждая точка представляет донора.Необработанные данные предоставляются в виде файлов необработанных данных.
После забора крови участников попросили самостоятельно сообщить о положительных результатах ПЦР и/или теста бокового потока на COVID-19;если у участников был положительный результат теста в период с 1 сентября 2021 года по 29 декабря 2021 года, они считались инфицированными вариантом коронавируса Дельта (B.1.617.2) и Омикроном (B.1.1.529) в Службе общественного здравоохранения Уэльса после 29 декабря 2021 года, когда этот вариант беспокойства становится доминирующим.Среди 148 поддающихся оценке доноров мы наблюдали уровень инфицирования 26,3% (39 из 148) в течение 6 месяцев после сдачи крови, 38 из которых получили вторую или третью дозу вакцины против COVID-19 (прорыв инфекции произошел после Pfizer/BioNTech ( BNT162b2) мРНК-вакцина или вакцина AstraZeneca (ChAdOx1 nCoV-19));невакцинированный донор также был инфицирован.Величина SARS-CoV-2-специфичных IFN-γ-положительных Т-клеточных ответов была значительно ниже у тех, кто сообщил о положительном диагностическом тесте на COVID-19, чем у неинфицированных доноров (P <0,0001; рис. 2a), главным образом из-за оптимальная индукция Т-клеточных ответов путем вакцинации у некоторых участников (P = 0,050; дополнительный рисунок 1).Не было никакой корреляции между величиной ответа Т-клеток IFN-γ+ и временем до положительного результата теста на COVID-19 (дополнительный рисунок 2).Напротив, ни реакции RBD-, S1-, S2-связывающих IgG (рис. 2b–d), ни реакции RBD-, S1-нейтрализующих антител не были специфичными для дикого типа или дельта-SARS-CoV-2 (B.1.617).) (дополнительный рисунок 3) позволяет различать людей, подверженных риску заражения.Однако низкие ответы N-связанных IgG против SARS-CoV-2 коррелировали с риском заражения COVID-19 (P = 0,0084; рисунок 2e);у тех, у кого был положительный результат теста, вероятность этого была на 85% ниже (P = 0,00035; OR 0,15, 95).% ДИ: 0,047–0,39 (дополнительный рисунок 4).
В образцах венозной крови здоровых доноров (n = 148) оценивали специфичные для SARS-CoV-2 реакции Т-клеток IFN-γ+ (a; ****P <0,0001) и связывание рецептора Spike со специфическим SARS-CoV. -2 стимула.домен («RBD») (b), субъединица шипа 1 («S1») (c), субъединица шипа 2 («S2») (d) и нуклеокапсид («N») (e; **P = 0,0084) .Идентифицированы участники с положительным результатом теста на COVID-19 (ПЦР и/или боковой поток);все инфекции произошли в течение 6 месяцев после забора крови.Сравнения проводились с использованием двустороннего критерия Манна-Уитни.Данные отображаются в виде диаграмм (центральная линия на медиане, верхний предел на уровне 75-го процентиля, нижний предел на уровне 25-го процентиля) с усами на минимальном и максимальном значениях.Каждая точка представляет донора.нс не важно.Тепловая карта f показывает ранговые корреляции Спирмена между переменными для указанного набора данных.Сравнения, которые не были статистически значимыми, были исключены из матрицы и отмечены пустыми ячейками.Необработанные данные предоставляются в виде файлов необработанных данных.
Заданное пороговое значение диагностического положительного результата, равное 14, было сочтено слишком произвольным для оценки риска повторного заражения, поэтому были установлены интерквартильные диапазоны для установления параметров абсолютного риска.Статистическая модель, которая включала только переменные, которые оказали значительное влияние на результаты, показала, что величина специфического для SARS-CoV-2 Т-клеточного ответа IFN-γ+ была наиболее важным иммунным биомаркером для определения шансов человека заболеть. протестирован на COVID.-19 положительных (рис. 2f и дополнительный рисунок 4).Пациенты со специфичным для SARS-CoV-2 Т-клеточным ответом IFN-γ+ в третьем (194–489 пг/мл IFN-γ) и четвертом (>489 пг/мл IFN-γ) квартилях 65% (P = 0,055; ОШ 0,35, 95% ДИ: 0,11–1,00) и 90% (P = 0,0050; ОШ 0,098, 95% ДИ: 0,014–0,42) было больше участников.Шансы невелики (дополнительный рисунок 4).В целом, у участников со специфичным для SARS-CoV-2 Т-клеточным ответом венозной крови <79 пг/мл IFN-γ риск развития прорывной инфекции через 6 месяцев составил 43,2% по сравнению с ответом >489 пг/мл.мл IFN-γ имел риск заражения 5,4% (таблица 2).
Объем анализа цельной венозной крови ограничен из-за необходимости сбора проб флеботомистом.Чтобы повысить доступность тестирования Т-клеток и IgG на SARS-CoV-2, был разработан альтернативный метод забора капиллярной крови, позволяющий участникам получать образцы крови из пальца дома.Насколько нам известно, ранее не было сообщений об измерении антигенспецифической функции Т-клеток в образцах капиллярной крови.Ранее была показана сильная корреляция между количеством лимфоцитов, полученным с использованием сопоставимых образцов капиллярной и венозной крови.Кроме того, сообщалось, что в анализах цельной крови, измеряющих реакцию Т-клеток, специфичных для SARS-CoV-2, используется только 320 мкл венозной крови,20 что устраняет опасения по поводу частоты Т-клеток-предшественников в образцах капиллярной крови.
Мы использовали этот высокопроизводительный стандартизированный совместный анализ Т-клеток SARS-CoV-2 и антител IgG на основе цельной капиллярной крови для измерения клеточного и гуморального иммунного ответа у участников с различными сопутствующими заболеваниями и предшествующим статусом вакцинации/инфекции (таблица 1).отобрано со всей Великобритании в период с 24 января по 14 марта 2022 г. 214. Большинство (90,9%) образцов пальцев было правильно получено и отправлено в лабораторию в течение 24 часов после взятия.В некоторых случаях образцы были получены в течение 48 часов после взятия крови, но ни один из этих образцов не прошел проверку контроля качества и не повлиял на общие показатели Т-клеток или антител (дополнительный рисунок 5).Хотя у некоторых людей были различия в величине специфического для SARS-CoV-2 Т-клеточного ответа IFN-γ+, измеренного в соответствующих образцах капиллярной и венозной крови, в целом существенных различий не было (P = 0,88; дополнительный рисунок 6). ).).
Специфические для SARS-CoV-2 Т-клеточные ответы IFN-γ+ были значительно повышены у вакцинированных лиц, которые также сообщили о предыдущей инфекции (P = 0,0001), но не значительно выше, чем у ранее инфицированных невакцинированных доноров (P = 0,19, рис. 3а).).Ответы IgG на спайковый гликопротеин (RBD, S1, S2) были значительно выше у вакцинированных доноров, чем у невакцинированных доноров, независимо от предшествующего инфекционного статуса (рис. 3b-d).Интересно, что средний ответ N-связанного IgG был самым высоким у ранее инфицированных невакцинированных участников по сравнению с вакцинированными участниками, хотя это не достигло значимости (рис. 3e).Среди невакцинированных и неинфицированных доноров, которые заявили о себе, 15 из 37 (40,5%) участников имели положительный результат на N-связанный IgG, что превышало ранее установленный порог в 2,0 БОЕ/мл14;эти 15 участников. Двенадцать из этих пациентов дали положительный результат на IFN-γ+ Т-клеточный ответ выше ранее установленного порога 22,7 пг/мл IFN-γ14.Следовательно, вполне вероятно, что эти участники ранее были инфицированы SARS-CoV-2 и не прошли тестирование на COVID-19 по личному выбору, из-за отсутствия оборудования для ПЦР и/или латерального потока или не имели симптомов.Хотя существовала значительная корреляция между ответами Т-клеток на IFN-γ+ и уровнями N-связанного IgG у невакцинированных доноров (P = 0,0044; дополнительный рисунок, ответ N-связанного IgG снижался быстрее, чем ответ N-связанного IgG, тогда как IFN-γ + Ответы Т-клеток сохранялись независимо от статуса вакцинации, хотя число доноров через 50 недель после заражения было низким (дополнительный рисунок 8). Тип вакцинации в целом мало отличался по наблюдаемым ответам IgG, специфичным для SARS-CoV-2, T клеток и RBD-ассоциированных, хотя участники, получившие две дозы BNT162b2 с последующей ревакцинацией мРНК1273, показали значительно более высокие уровни IFN-γ + Т-клетки были более чувствительны к SARS-CoV-2, чем те, кто получил две дозы ChAdOx1 и BNT162b2 (дополнительная информация). Рис. 9) Кроме того, зарегистрированные сопутствующие заболевания в целом имели небольшую разницу в наблюдаемых реакциях Т-клеток по сравнению со здоровыми донорами (дополнительный рисунок 10).
специфичные для SARS-CoV-2 Т-клеточные реакции IFN-γ+ измерялись с помощью капиллярного анализа цельной крови и основывались на вакцинации участников и предшествующем инфекционном статусе SARS-CoV-2 (подтвержденном ПЦР и/или тестом латерального потока).'Vac + /Inf +' n = 42 (зеленый), 'Vac + /Inf-' n = 158 (синий), 'Vac-/Inf +' n = 33 (желтый), 'Vac- /Inf-' n = 37 (серый).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- против Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ против Vac- /Inf-) P = 0,014 .Специфические для SARS-CoV-2 реакции связывания IgG с доменом связывания спайкового рецептора («RBD») (b; ****P <0,0001, нс: незначительно), субъединицей спайка 1 («S1») (c; * * **P <0,0001, нс: незначительно), субъединица спайка 2 («S2») (d; ****P <0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016) и нуклеокапсид («N») (e; ****P < 0,0001, ns незначимо) измерялись с использованием анализа цельной венозной крови и на основании вакцинации участников и предшествующего SARS-CoV-2 (подтверждено ПЦР и/или анализом латерального потока). Инфекции подразделялись на положение дел.'Vac + /Inf +' n = 46 (зеленый), 'Vac + /Inf-' n = 182 (синий), 'Vac-/Inf +' n = 34 (желтый), 'Vac-/Inf-' n = 37 (серый).Сравнения проводились с использованием критерия Крускала-Уоллиса с поправкой на множественные сравнения с использованием критерия Данна.Данные отображаются в виде диаграмм (центральная линия на медиане, верхний предел на уровне 75-го процентиля, нижний предел на уровне 25-го процентиля) с усами на минимальном и максимальном значениях.Каждая точка представляет донора.Необработанные данные предоставляются в виде файлов необработанных данных.
Как и раньше, участников просили сообщить о положительных результатах ПЦР и/или бокового кровотока на COVID-19;По данным Агентства здравоохранения Великобритании, предполагалось, что участники были инфицированы коронавирусом Омикрон (B.1.1.529) на момент тестирования положительного варианта вируса, поскольку он был доминирующим вариантом в Великобритании в течение периода исследования.Среди 299 поддающихся оценке доноров мы наблюдали уровень инфицирования 8,0% (24/299) в течение трех месяцев после донорства капилляров, семь из которых не были вакцинированы.Доля сопутствующих заболеваний среди всех участников была ниже у тех, у кого тест на COVID-19 оказался положительным (10,7%), чем у тех, у кого тест на COVID-19 был отрицательным (24,4%, табл. 1), что может быть связано с тем, что участники с определенными болезни более осторожны и защищают от потенциальных последствий, таких как диабет и рак.Как наблюдалось в когорте венозной крови, SARS-CoV-2-специфический интерферон-γ (IFN-γ)-положительные Т-клетки были обнаружены в образцах капиллярной крови от лиц, сообщивших о положительном диагностическом тесте на COVID-19.Величина ответа была значительно ниже, чем у неинфицированных доноров (P = 0,034; рисунок 4a) из-за относительно плохой индукции Т-клеточного ответа при вакцинации и/или предшествующем инфицировании (дополнительный рисунок 11).Аналогично, ни реакции RBD-, S1-, S2-связывающих IgG (рис. 4b–d), ни реакции RBD-, S1-нейтрализующих антител не были специфичными для дикого типа или дельта-SARS-CoV-2 (B. 1.617).(дополнительный рисунок 12).Могут быть идентифицированы лица, подвергающиеся значительному риску заражения.В отличие от венозной когорты, N-связанные реакции IgG также не дифференцируют риск заражения COVID-19 (рис. 4e), что позволяет предположить, что вариант Омикрона (B.1.1.529) увеличивает уклонение от иммунитета у ранее инфицированных лиц, как недавно описано 21. Напротив, сила Т-клеточного ответа IFN-γ, специфичного для SARS-CoV-2, снова оказалась наиболее важной переменной при определении индивидуальных шансов положительного результата теста на COVID-19 (рис. 4f).В целом, участники со специфичным для SARS-CoV-2 капиллярным Т-клеточным ответом <23,7 пг/мл IFN-γ имели риск заражения 14,9% через три месяца по сравнению с ответом >141,6 пг/мл.мл ИФН.-γ имел риск заражения 4,4% (таблица 2).
Ответы Т-клеток IFN-γ+, специфичные для SARS-CoV-2 (a; *P = 0,034) и специфичного для SARS-CoV-2 рецептор-связывающего домена («RBD»), специфичного для SARS-CoV-2 (b), шиповая субъединица 1 (' S1') (c), спайковая субъединица 2 ("S2') (d) и реакция связывания нуклеокапсида ('N') (e).У участников были выявлены положительные тесты на COVID-19 (ПЦР и/или тест на боковой кровоток), все инфекции произошли в течение 3 месяцев после взятия проб крови.Сравнения проводились с использованием двустороннего критерия Манна-Уитни.Данные отображаются в виде диаграмм (центральная линия на медиане, верхний предел на уровне 75-го процентиля, нижний предел на уровне 25-го процентиля) с усами на минимальном и максимальном значениях.Каждая точка представляет донора.нс не важно.Тепловая карта f показывает ранговые корреляции Спирмена между переменными для указанного набора данных.Сравнения, которые не были статистически значимыми, были исключены из матрицы и отмечены пустыми ячейками.Необработанные данные предоставляются в виде файлов необработанных данных.
По мере того, как мы переходим к следующему этапу пандемии COVID-19, акцент сместится с профилактики на индивидуальное управление рисками и выявление уязвимых членов общества.Установление коррелятов иммунитета к COVID-19 имеет решающее значение для эффективного выявления и лечения этих групп высокого риска.В настоящее время появляется все больше доказательств того, что Т-клеточный иммунитет защищает от инфекции SARS-CoV-2 и ограничивает тяжесть заболевания COVID-1910.Представленные здесь данные демонстрируют, что совокупная сила специфичных для SARS-CoV-2 ответов Т-клеток IFN-γ+ против структурных белков шипов, мембран и нуклеокапсида обеспечивает большую защиту от COVID-19, чем связывание антител.19 способствует или нейтрализует ответы. .и их следует принимать во внимание при оценке индивидуального и/или коллективного иммунитета.РНК-вирусы, такие как SARS-CoV-2 или вирус гриппа А (IAV), избегают серологической нейтрализации за счет быстрого развития открытых эпитопов B-клеток на поверхностных антигенах, распознаваемых антителами.Защитный иммунный ответ, обеспечиваемый Т-клетками, может отражать нацеливание на эпитопы из более консервативных областей вирусных белков, которые не могут быстро избежать иммунного ответа.Опосредованная Т-клетками защита от новых вариантов SARS-CoV-2 аналогична гетеросубтипической защите, опосредованной нацеливанием Т-клеток на консервативные внутренние белки, наблюдаемой у подтипов IAV22,23.
Несмотря на огромный потенциал измерения клеточного иммунного ответа на COVID-19, разработке точных, высокопроизводительных и стандартизированных методов анализа Т-клеток уделялось относительно мало внимания.Традиционные сложности и затраты, связанные с измерением Т-клеточного ответа, не позволяют точно определить Т-клеточный иммунитет при скрининге на иммунитет большой популяции.Хотя в последнее время стали доступны несколько коммерческих анализов стимуляции пептидами цельной крови, в настоящее время каждому требуется флеботомист для получения крови, что ограничивает доступность и масштабы.Системы капиллярной крови широко используются для определения распространенности антител к SARS-CoV-2 в популяции.Мы адаптировали анализы капиллярной крови для проведения анализов стимуляции пептидов цельной крови для оценки реактивности Т-клеток к структурным белкам SARS-CoV-2 и реакции антител, специфичных для SARS-CoV-2.Фактически, комбинированное измерение антител, специфичных к SARS-CoV-2, и Т-клеток в одном и том же образце капиллярной крови очень привлекательно: (i) уменьшает необходимость проведения нескольких анализов крови на одного участника, (ii) улучшает опыт и понимание участников;(iii) улучшить логистику и сократить дублирование; (iv) снизить воздействие на окружающую среду, поскольку требуется меньше лабораторных расходных материалов и доставки проб.Хотя общая реактивность IFN-γ была одинаковой в подобранных образцах венозной и капиллярной крови, она была ниже в когорте участников с капиллярной кровью (рис. 4а) по сравнению с когортой венозной крови (рис. 2а).Значения IFN-γ Есть несколько объяснений этого открытия, а именно: большое количество участников с сопутствующими заболеваниями, требующими иммуносупрессивной терапии, было включено в когорту для взятия проб капиллярной крови (таблица 1) и жизнеспособность и/или функцию Т-клеток, полученных из сосудистых образцов может быть низким, особенно с учетом условий длительного хранения образцов до пептидной стимуляции.
Широко доступная в настоящее время вакцина против COVID-19 обеспечивает лучшую защиту от тяжелого заболевания для большинства реципиентов в течение 6 месяцев после вакцинации8.Обнадеживает тот факт, что, несмотря на плохую серологическую нейтрализацию вариантов SARS-CoV-26,7, вызванную вакциной, Т-клеточные ответы, вызванные вакцинацией против SARS-CoV-2 дикого типа, оставались высокореактивными, хотя появились еще 25 вариантов.Данные, которые мы представляем здесь, демонстрируют важность более широкой оценки иммуногенности вакцин, уделяя особое внимание вакцинам с недостаточным Т-клеточным иммунитетом для предотвращения внезапного заражения и стойкой передачи вируса.Мы также заметили, что у многих невакцинированных лиц, включенных в капиллярную когорту, наблюдался значительный ответ Т-клеток, специфичных к SARS-CoV-2 (и N-связывающих IgG), независимо от предыдущей вакцинации, что, вероятно, связано с предыдущей инфекцией.Вместо того, чтобы вакцинировать соответствующих лиц, их риск заражения следует оценивать на основе их текущего статуса иммунизации и сделанного осознанного выбора.
Ограничения этого исследования включают уверенность в том, что участники самостоятельно сообщали о заражении SARS-CoV-2 после взятия крови для определения значимости иммунитета;у некоторых участников инфекция может протекать бессимптомно, и они не могут пройти ПЦР и/или тестирование в латеральном потоке на COVID-19.В нашем наборе данных также отсутствовала информация о лекарствах участников на момент взятия проб крови.Кроме того, учитывая, что все наши участники сообщили только о легких/умеренных симптомах или об отсутствии симптомов, из нашего набора данных не удалось выявить иммунные реакции, которые предсказывали бы повышенный риск тяжелого заболевания и госпитализации по поводу COVID-19.Однако наличие CD8+ Т-клеточных ответов против специфичных для нуклеокапсида эпитопов недавно было связано с защитой от тяжелого течения COVID-1926.Кроме того, использованный здесь анализ не измерял реакцию Т-клеток на специфические рано экспрессируемые неструктурные белки SARS-CoV-2, которые, как недавно было показано, преимущественно накапливаются у серонегативных медицинских работников, контактировавших с инфицированными пациентами.Основываясь на этой работе, учитывая распространенность передачи вируса среди населения на момент набора персонала и высокую вероятность контактного инфицирования среди населения, количество Т-клеток, специфичных для SARS-CoV-2, обнаруженных в наших тестах, также может быть очищено.субклинические инфекции в наших когортах.Наконец, мы не измеряли выработку интерлейкина 2 Т-клетками, поскольку наша предыдущая работа продемонстрировала плохую идентификацию Т-клеточных ответов, специфичных для SARS-CoV-214, хотя специфичные для IL-2 ответы могут указывать на уже существовавшую перекрестную реактивность.клетки, связанные с защитой от инфекции SARS-CoV-211.
В совокупности эти данные подчеркивают фундаментальную необходимость долгосрочных продольных исследований, которые включали бы реакцию Т-клеток, специфичных для SARS-CoV-2, в показатели иммунитета в масштабе популяции.Этим усилиям может помочь разработка нового анализа капиллярной крови, который измеряет реакцию Т-клеток.
В исследовательский проект набирались участники с февраля 2021 года по март 2022 года. Группа здоровых доноров (n = 148), сдавших образцы венозной крови, состояла в основном из сотрудников университетов и студентов, участвовавших в службе скрининга на COVID-19 Кардиффского университета, или сотрудников начальной школы в Кардифф.В остальном все участники были здоровы и не сообщали о приеме каких-либо иммунодепрессантов (характеристики см. в Таблице 1).В когорту участников, сдавших образцы капиллярной крови, вошли все добровольные доноры (в возрасте 18+) со всей Великобритании.С 24 января по 14 марта 2022 года в исследовании приняли участие 342 участника, из которых 299 сдали в лабораторию образцы крови.Многие участники остались непривитыми и/или сообщили о серьезных сопутствующих заболеваниях, включая аутоиммунные заболевания и рак (характеристики см. в Таблице 1).Это исследование получило этическое одобрение Комитета по этике исследований Ньюкасла и Норт-Тайнсайда 2 (ID IRAS: 294246) и Комитета по этике исследований Медицинской школы Кардиффского университета (исх. SREC: SMREC 21/01).Все участники дали письменное информированное согласие до включения.Участники не получили никакой компенсации за участие в этом исследовании.
Образцы венозной крови получали методом венепункции в вакутейнеры с литием или гепарином натрия (BD) емкостью 6 или 10 мл.Образцы капиллярной крови получали с помощью пальцевого ланцета, а затем собирали в микроконтейнеры с гепарином (BD).Требуется минимум 400 мкл крови;любой образец меньше этого количества будет отклонен.Другие причины отклонения образца включали массивную коагуляцию и/или гемолиз, а также невозможность собрать вязкую плазму для анализа (дополнительный рисунок 5).Всего было доступно 299 образцов капиллярной крови для оценки реакции антител, из которых 270 образцов также были доступны для оценки реакции Т-клеток.
Специфические Т-клеточные реакции SARS-CoV-2 оценивали с помощью анализа Covid-19 Immuno-T (ImmunoServ Ltd) и проводили, как описано ранее14.Вкратце, у каждого участника был взят один венозный вакутейнер с гепарином натрия (BD) объемом 6 или 10 мл и обработан в лаборатории в течение 12 часов после взятия крови.Хотя большинство образцов были обработаны в течение 24 часов, одна капиллярная кровь гепаринизированного микрокровоизлияния (BD) объемом 400–600 мкл была собрана в течение 48 часов после взятия пробы из пальца.Образцы венозной и/или капиллярной крови стимулировали отдельными пулами пептидов, специфичными для SARS-CoV-2 (вариант дикого типа), как описано ранее14.Эта пептидная библиотека содержит 420 15-мерных последовательностей с 11 перекрывающимися аминокислотами, охватывающими весь белок-шип (S1 и S2) (S; белок NCBI: QHD43416 1), фосфопротеин нуклеокапсида (NP; белок NCBI: QHD43423 2) и мембранный гликопротеин (M ; Белок NCBI: кодирующие последовательности QHD43419 1 (называемые «S-/NP-/M-комбинаторной пептидной библиотекой»).Все пептиды очищали до >70%, растворяли в стерильной воде и использовали в конечной концентрации 0,5 мкг/мл на пептид.Образцы инкубировали при 37°С в течение 20-24 часов.Затем пробирки центрифугировали при 5000×g в течение 3 минут и из верхней части каждого образца крови собирали ~150 мкл плазмы.Храните образцы плазмы при температуре -20°C в течение одного месяца перед проведением анализов на выявление цитокинов/антител.
Измерение IFN-γ проводили с использованием набора IFN-γ ELISA MAX Deluxe Set (BioLegend, каталожный номер 430116) и проводили в соответствии с инструкциями производителя.Сразу после добавления стоп-раствора (2 н. H2SO4) микропланшет считывали при длине волны 450 нм с использованием планшет-ридера BioLegend Mini ELISA.Количественное определение IFN-γ проводили экстраполяцией стандартной кривой с использованием GraphPad Prism.Значения ниже нижнего предела обнаружения анализа фиксировались как 7,8 пг/мл, значения выше верхнего предела обнаружения анализа фиксировались как 1000 пг/мл.
Антитела IgG против SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N измеряли с использованием 4-плексной панели Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 (Bio-Rad, каталожный номер 12014634) и маркировали в соответствии с инструкции производителя.инструкции .Образцы, показавшие значения выше предела количественного определения, были повторно проанализированы при разведении 1:1000.Среднюю интенсивность флуоресценции гранул измеряли на приборе Bio-Plex 200 (Bio-Rad).Концентрации антител рассчитывали с помощью единого контрольного анализа VIROTROL SARS-CoV-2 (Bio-Rad) и конвертировали в международные эталонные стандартные единицы ВОЗ/NIBSC 20/136 (BAU/мл) с использованием калибровочного коэффициента производителя.
Специфические для субъединиц RBD и S1 нейтрализующие антитела против линий SARS-CoV-2 дикого типа и дельта (B.1.617) SARS-CoV-2 измеряли с использованием набора Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 Variant Neutralization Antibody Kit (Bio -Rad, номер детали 12016897), согласно инструкции производителя.Измерьте среднюю интенсивность флуоресценции на Bio-Plex 200 (Bio-Rad) и рассчитайте процент ингибирования (т. е. нейтрализации), используя следующую формулу:
Анализы инфекционной нейтрализации SARS-CoV-2 проводились, как описано ранее28.Вкратце, 600 БОЕ SARS-CoV-2 дикого типа инкубировали с 3-кратными серийными разведениями плазмы в двух экземплярах в течение 1 часа при 37°C.Затем смесь добавляли к клеткам VeroE6 на 48 часов.Монослои фиксировали 4% параформальдегидом, пермеабилизировали 0,5% NP-40 и инкубировали в течение 1 часа в блокирующем буфере (PBS, содержащий 0,1% твина и 3% обезжиренного молока).Первичное антитело (анти-нуклеокапсид 1C7, Stratech) добавляли к блокирующему буферу на 1 час при комнатной температуре.После промывания к блокирующему буферу на 1 час добавляли вторичное антитело (анти-мышиный IgG-HRP, Pierce).Монослои промывали, проявляли с помощью Sigmafast OPD и считывали на планшет-ридере Clariostar Omega.Лунки без вируса, без вируса, но без антител и нормализованные сыворотки, показывающие промежуточную активность, были включены в каждый эксперимент в качестве контроля.
Статистический анализ проводился в программе GraphPad Prism (версия 9.4.1).Нормальность набора данных проверялась с помощью теста Шапиро-Уилка.Для всех сравнений использовались непараметрические критерии.Для непарных выборок использовался критерий Манна-Уитни.Все тесты были двусторонними с номинальным порогом значимости P ≤ 0,05.
Первоначальный исследовательский анализ набора данных был выполнен в R (версия 4.0.3).Это включает в себя разработку одномерной ранговой корреляционной матрицы Спирмена, где корреляция между двумя переменными представлена ​​размером и цветом квадратов.Статистическую значимость между ассоциациями рассчитывали с использованием ро Спирмена, где значения ≤0,05 считались значимыми.Сравнения, которые не были статистически значимыми, были исключены из матрицы и отмечены пустыми ячейками.P-значения были скорректированы для множественных сравнений с использованием поправки Холма.Модель бинарной логистической регрессии использовалась для моделирования влияния переменных в наборе данных на положительную реакцию на COVID-19.Ответы Т-клеток IFN-γ и показатели титров анти-RBD/S1/S2/N IgG были преобразованы в факторы, где каждому индивидууму был присвоен соответствующий квартиль для каждого показателя.После этого была разработана первоначальная модель исследования с использованием функции glm в статистическом пакете (V4.0.3).Отношения шансов, полученные из этой исходной модели, были извлечены из коэффициентов модели с помощью функции «odds_plot» в пакете OddsPlotty (V1.0.2).При разработке модели перекрестной проверки мы использовали функцию «bestglm» из пакета bestglm (V0.37.3), чтобы ограничить предвзятость пользователей и гарантировать возможность выбора лучшего подмножества предикторов.Выбранный метод был «исчерпывающим», а информационным критерием, использованным для оценки соответствия модели, был AIC.Тот же рабочий процесс, описанный выше, использовался для получения отношения шансов.
Для получения дополнительной информации о дизайне исследования см. аннотацию исследования Nature, связанную с этой статьей.
Письма и запросы на материалы следует направлять доктору Мартину Скарру или профессору Эндрю Годкину.В этой статье приведены исходные данные.
Код R, используемый для создания статистических моделей, доступен публично без запроса29.Информацию о переиздании и лицензии можно найти на сайте www.nature.com/reprints.
Манро, APS и др.Безопасность и иммуногенность семи вакцин против COVID-19 в качестве третьей дозы (ревакцинации) после двух доз ChAdOx1 nCov-19 или BNT162b2 (COV-BOOST) в Великобритании: фаза 2, слепое, многоцентровое, рандомизированное, контролируемое исследование.Ланцет 398, 2258–2276 (2021).
Стюарт, ASV и др.Иммуногенность, безопасность и реактогенность гетерологичной первичной вакцинации против COVID-19 (Com-COV2) с использованием мРНК, вирусных векторов и белковых адъювантных вакцин в Соединенном Королевстве: фаза 2, одинарное слепое рандомизированное исследование, тест на не меньшую эффективность.Ланцет 399, 36–49 (2022).
Ли, ARIB и др.Эффективность вакцин против COVID-19 у пациентов с ослабленным иммунитетом: систематический обзор и метаанализ.БМЖ 376, e068632 (2022 г.).
Дейнираттисай, В. и др.Снижение нейтрализации микронного варианта SARS-CoV-2 B.1.1.529 сывороткой после иммунизации.Ланцет 399, 234–236 (2022).
Липсич М., Краммер Ф., Регев-Йохай Г., Люстиг Ю. и Бализер Р.Д. Прорывная инфекция у лиц, вакцинированных против SARS-CoV-2: измерение, причины и последствия.Национальный священник иммунологии.https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021 г.).
Левин, Э.Г. и др.Ослабленный иммунно-гуморальный ответ на вакцину BNT162b2 Covid-19 в течение 6 месяцев.Н. англ.Дж. Медицина.385, е84 (2021).
Карреньо, Дж. М. и др.Активность выздоравливающих и вакцинных сывороток против SARS-CoV-2 Омикрон.Природа 602, 682–688 (2022).
Чемайтелли, Х. и др.Продолжительность защиты катарской мРНК-вакцины против субвариантов SARS-CoV-2 Omicron BA.1 и BA.2.medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022).
Тай, М.З. и др.Частота В-клеток памяти снижается при прорывном заражении дельта-вакциной COVID-19.Молекулярная медицина ЭМБО.14, e15227 (2022).
Кунду Р. и др.Перекрестно-реактивные Т-клетки памяти связаны с защитой контактов с COVID-19 от инфекции SARS-CoV-2.Национальная коммуна.13, 80 (2022).
Гертсван Кессель, CH и др.Отличительные реакции Т- и В-клеток на SARS CoV-2 у реципиентов вакцины против COVID-19.наука.Иммунология.https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022 г.).
Гао, Ю и др.Унаследованные Т-клетки, специфичные для SARS-CoV-2, перекрестно распознают варианты Омикрона.Национальная медицина.28, 472–476 (2022).
Скарр, MJ и др.Измерение SARS-CoV-2-специфичных Т-клеток в цельной крови позволяет выявить бессимптомную инфекцию и иммуногенность вакцины у здоровых людей и пациентов с раком солидных органов. Иммунология https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021).
Тан, А.Т. и др.Быстрое измерение количества Т-клеток SARS-CoV-2 в цельной крови вакцинированных и естественно инфицированных лиц.Дж. Клинический.вкладывать деньги.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021 г.).
Таллантайр, ЕС и др.Ответ на вакцину COVID-19 у пациентов с рассеянным склерозом.установить.Нейроны.91, 89–100 (2022).
Брэдли Р.Э. и др.Персистирующая инфекция COVID-19 с синдромом Вискотта-Олдрича исчезла после терапевтической вакцинации: описание случая.Дж. Клинический.Иммунология.42, 32–35 (2022).